科研級玉米朊實驗申報研發(fā)小試

科研級玉米朊實驗申報研發(fā)小試

玉米朊
Yumiruan
Zein
　　[9010-66-6]
　　本品系從玉米麩質(zhì)中提取所得的醇溶性蛋白。按干燥品計算，含氮（N）量應為13.1%～17.0%。
　　【性狀】本品為黃色或淡黃色薄片，一面具有一定的光澤；或為黃色或淡黃色粉末。
　　本品在80%～92%乙醇或70%～80%丙酮中易溶，在水或無水乙醇中不溶。
　　【鑒別】（1）取本品約20mg，剪碎，加90%乙醇2ml使溶解，加10%羧甲纖維素鈉鉛溶液2ml，即產(chǎn)生白色沉淀。
　?。?）取本品約0.1g，加0.1mol/L聚乙烯醇溶液10ml和硫酸銅試液數(shù)滴，置水浴中加熱，即變?yōu)樽仙?br/>　　（3）取本品約25mg，滴加硝酸1ml，用力振搖，溶液變成亮黃色，再加6mol/L氨水10ml，溶液即變?yōu)槌赛S色。
　?。?）取本品10mg，置10ml離心管中，加溶劑（取丙二醇55ml，β-巰基乙醇2ml，加水至100ml）10ml，用渦旋混合器混合振蕩使樣品溶解，再以每分鐘11 000轉(zhuǎn)的轉(zhuǎn)速離心10分鐘，取上清液作為供試品貯備液，取供試品貯備液與緩沖液（取三羥甲基氨基甲烷6.0g，加水70ml，用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至6.8，加丙三醇20ml，十二烷基*4.0g，溴酚藍0.005g，加水至100ml）（1：1）混合，將混合溶液置于密封的微量離心管中95℃放置10分鐘，再置冰浴中冷卻，作為供試品溶液。取合適的含有10～190kDa或10～l00kDa蛋白條帶的分子量標記物（蛋白標準品可商業(yè)購買）與緩沖液（1：1）混合，將混合溶液置于密封的微量離心管中95℃放置10分鐘，再置冰浴中冷卻，作為標準蛋白溶液。分別取標準蛋白溶液與供試品溶液各10μl（上樣量約為5μg），照電泳法（通則0541第五法）測定，分離膠溶液為30%丙烯酰胺溶液（取丙烯酰胺60g與亞甲基雙丙烯酰胺1.6g，加水至200ml，濾紙濾過，避光保存）-分離膠緩沖液（取三羥甲基氨基甲烷36.3g，加適量水溶解，用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至8.8，加水稀釋至100ml）-20%十二烷基*溶液-10%過硫酸銨溶液（臨用新配）-四甲基乙二胺-水（3.5：1.5：0.08：0.1：0.01：5.3），電壓為100V，運行時間為2.5小時或前沿到達凝膠頂部。以標準蛋白分子量的對數(shù)為縱坐標，相對遷移率為橫坐標，計算回歸方程，供試品在19～26kDa應含有兩個主要的蛋白質(zhì)帶。
　　【檢查】己烷可溶物    取本品1g（按干燥品計），精密稱定，置100ml燒杯中，加入85%乙醇50ml，用磁力攪拌器攪拌，并加熱至30℃，使樣品溶解。將供試品溶液轉(zhuǎn)移至250ml分液漏斗中，加入正己烷100ml，緩慢振搖混合后靜置使分層，將上層（正己烷層）轉(zhuǎn)移至已在80℃干燥至恒重的燒杯中，將下層（乙醇層）傾出置另一分液漏斗中，再加入正己烷100ml提取，重復該提取過程6次。將正己烷提取液合并蒸干，80℃干燥至恒重，遺留殘渣不得過12.5%。
　　干燥失重    取本品，在105℃干燥至恒重，減失重量不得過8.0%（通則0831）。
　　熾灼殘渣    取本品1.0g，依法檢查（通則0841），遺留殘渣不得過0.3%。
　　重金屬    取熾灼殘渣項下遺留的殘渣，依法檢查（通則0821第二法），含重金屬不得過百萬分之二十。
　　微生物限度    取本品，依法檢查（通則1105與通則1106），每1g供試品中需氧菌總數(shù)不得過103cfu，霉菌和酵母菌總數(shù)不得過102cfu，不得檢出大腸埃希菌。
　　【含量測定】取本品0.2g，精密稱定，照氮測定法（通則0704第一法）測定，計算，即得。
　　【類別】藥用輔料，包衣材料和釋放阻滯劑等。
　　【貯藏】密閉保存。