紅車軸( Trifolium pratense L. )為豆科( Leguminosae)車軸草屬多年生草本植物，又名紅三葉草(Red Clover)、紅花苜蓿和三葉草等，因植物中含有較為豐富的異黃酮，其提取物已被廣泛應(yīng)用于各種保健品或飲食增補(bǔ)劑中，用于預(yù)防乳腺癌、 改善骨質(zhì)疏松、婦女更年期綜合癥等，許多國(guó)家因此將其納入法定標(biāo)準(zhǔn)，美國(guó)藥典-國(guó)家處方集的飲食增補(bǔ)劑分冊(cè)( Botanical official monographs in USP30-NF25)就收載紅車軸草植物、植物粉末、植物提取物、片劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。在我國(guó)，紅車軸草的植物資源十分豐富，南北各地均有野生分布和大面積栽培，每年對(duì)歐美市場(chǎng)出口大量的紅車軸草提取物。

【提取方法】

提取與分離紅車軸草干燥藥材3 kg，切段，以20倍量80%乙醇回流提取3 次，每次2 h，合并提取液，減壓濃縮得稠浸膏約400 g，所得浸膏以甲醇溶解，濾液加適量硅膠拌樣，進(jìn)行硅膠(100～200目)柱層析，以石油醚、石油醚-乙酸乙酯、 乙酸乙酯-甲醇梯度洗脫，薄層色譜檢識(shí)跟蹤合并相同或相似洗脫流份，所得各洗脫部位再經(jīng)薄層層析硅膠柱層析，并結(jié)合SephadexLH-20凝膠柱層析、薄層制備、 反相液相制備色譜等方法，分離得到13個(gè)單體化合物，其中包括8個(gè)異黃酮成分和2個(gè)黃酮成分。

【藥理作用】

目前，已有一些研究表明紅車軸草異黃酮提取物對(duì)更年期綜合癥有改善作用，同時(shí)還有一些紅車軸草異黃酮提取物改善其他病癥的報(bào)道，如骨質(zhì)疏松癥、 心血管疾病、癌癥和經(jīng)期前綜合征等而這些功效均與其活性成分異黃酮有關(guān)。

已有報(bào)道指出染料木黃酮、大豆素、鷹嘴豆芽素A和刺芒柄花素具有過氧化物酶體增殖物激活受體（peroxisome proliferator activated receptor, PPAR）α和γ雙激動(dòng)劑活性而它們是紅車軸草異黃酮提取物的主要組成成分。PPARs是核受體超家族成員之一，參與了脂肪細(xì)胞分化、脂代謝調(diào)節(jié)等重要的生理過程，它有三種亞型（α、β、γ），其中PPARα是肝臟中脂質(zhì)代謝酶類的主要轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，而PPARγ參與脂肪細(xì)胞分化和脂代謝調(diào)節(jié)，對(duì)胰島素敏感性也具有調(diào)節(jié)作用。 PPARα的一些激動(dòng)劑如貝特類化合物已用于治療血脂異常，而PPARγ的一些激動(dòng)劑如噻唑烷二酮類化合物等已用于糖尿病的臨床治療。

紅車軸草異黃酮可以顯著降低 db/db2型糖尿病小鼠血糖水平，但之前的研究發(fā)現(xiàn)紅車軸草異黃酮對(duì)1型糖尿病小鼠并未顯現(xiàn)出降血糖的作用，可能是由于1型糖尿病和2型糖尿病的發(fā)病機(jī)制不同：1型糖尿病是由于胰腺β細(xì)胞受損引起的自身的免疫反應(yīng)而發(fā)??；2 型糖尿病則是體內(nèi)周圍組織對(duì)胰島素的敏感性降低，而紅車軸草異黃酮中的主要組分鷹嘴豆芽素A和刺芒柄花素作為胰島素增敏劑改善了 db/db-糖尿病小鼠的胰島素耐受性，其確切機(jī)制還有待進(jìn)一步的研究。

有一些研究報(bào)道了紅車軸提取物降甘油三酯、總膽固醇的作用。經(jīng)過紅車軸草異黃酮提取物的處理后，實(shí)驗(yàn)小鼠的甘油三酯、總膽固醇等水平都得到了一定的降低，小鼠肝組織中APOC3的mRNA表達(dá)得到了下調(diào)。

最近研究發(fā)現(xiàn)紅車軸草異黃酮能夠通過提高雌激素作用，有效抑制骨吸收，降低骨轉(zhuǎn)化率，增強(qiáng)成骨細(xì)胞活性及骨密度，對(duì)骨質(zhì)疏松具有一定的防治作用。

在研究紅車軸提取物對(duì)破骨細(xì)胞數(shù)目及骨吸收過程中采用0.3 g/L、0.6 g/L和1.2 g/L 3個(gè)紅車軸草提取物質(zhì)量濃度，比較不同劑量紅車軸草對(duì)破骨細(xì)胞影響，發(fā)現(xiàn)隨著紅車軸草劑量的增加對(duì)破骨細(xì)胞的抑制作用增加，因此破骨細(xì)胞相關(guān)分化蛋白研究采用1.2 g/L紅車軸草劑量進(jìn)行研究。破骨細(xì)胞給予紅車軸草提取物連續(xù)培養(yǎng)14 d，測(cè)定破骨細(xì)胞分化相關(guān)蛋白NFATc-1和c-fos結(jié)果發(fā)現(xiàn)，給予紅車軸草提取物能夠明顯降低NFATc-1和c-fos蛋白的表達(dá)，說明紅車軸草提取物可能通過降低NFATc-1和c-fos蛋白的表達(dá)，進(jìn)而抑制破骨細(xì)胞分化。