| 一、細胞基本屬性 | |
| 細胞名稱 | 人正常乳腺上皮細胞 |
| 細胞別稱 | MCF 10A; MCF.10A; MCF10A; MCF10a; MCF-10 Attached; Michigan Cancer Foundation-10A |
| 細胞貨號 | SNL-225 |
| 細胞種屬 | 人 |
| 生長情況 | 貼壁 |
| 培養(yǎng)條件 | DM/F12＋5% HS＋20ng/mL EGF＋0.5μg/mL Hydrocortisone＋10μg/mL Insulin＋1% NEAA +1%雙抗 |
| 培養(yǎng)環(huán)境 | air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5% |
| 二、細胞培養(yǎng)操作 | |
| 換液周期 | 2-3天 |
| 培養(yǎng)基體積 | T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml |
| 傳代比例 | 1:2-1:4（具體情況視細胞生長速度及密度決定） |
| 傳代方法 | 1.盡量吸干凈T25瓶原培養(yǎng)基； 2.加3-4ml 常溫PBS輕輕潤洗細胞10-20s，吸走潤洗的PBS； 3.T25瓶加1ml左右胰酶，輕輕晃動培養(yǎng)瓶以使胰酶鋪勻瓶底細胞層； 4.將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱消化； 5.消化到細胞間隙變大，但未*脫落時加2-3ml*培養(yǎng)基終止胰酶消化； 6.混勻細胞，900rpm離心3-5min，棄上清； 7.加新的*培養(yǎng)基輕輕重懸細胞，均勻分到新的培養(yǎng)瓶里； 8.補足*培養(yǎng)基，將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)； |
| 注意事項 | 不同品牌胰酶消化時間差別較大，注意嚴格控制消化時間 消化傳代細胞時吹打細胞注意盡量輕柔，不要產生過多氣泡以免影響細胞狀態(tài)。 |
| 三、細胞凍存操作 | |
| 凍存液配方 | 92%FBS+8%DMSO(新手tui薦)或92%*培養(yǎng)基+8%DMSO(高手tui薦); |
| 凍存規(guī)格 | 200-300萬/ml，1ml每管 |
| 凍存方法 | 1.消化并離心獲得細胞沉淀后，加配置好的凍存液輕輕重懸細胞； 2.將細胞懸液盡快移入已經做好標記的凍存管； 3.將凍存管轉入程序凍存盒，放入-80度冰箱過夜，第二天轉入液氮保存；沒有程序凍存盒的實驗室，加入細胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min，再-20度靜置2h后轉入-80度過夜，第二天轉入液氮保存 |
| 注意事項 | 凍存細胞轉入液氮后及時復蘇一管檢查細胞凍存活性，若有異常，及時調整實驗方案 |
Tips：
1.細胞貼壁偏緊，消化時間偏長，注意控制消化時間避免消化狀態(tài)變差。
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