| 一、細胞基本屬性 | |
| 細胞名稱 | 人惡性非霍奇金淋巴瘤患者NK細胞 |
| 細胞別稱 | NK-92MI; NK-92 M; NK-92 mi; NK92-MI; NK92Ml; NK-92 transfected with MFG-Hil2 |
| 細胞貨號 | SNL-195 |
| 細胞種屬 | 人 |
| 生長情況 | 懸浮 |
| 培養(yǎng)條件 | 1640+10%FBS+1%雙抗 |
| 培養(yǎng)環(huán)境 | air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5% |
| 二、細胞培養(yǎng)操作 | |
| 換液周期 | 2-3天 |
| 培養(yǎng)基體積 | T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml |
| 傳代比例 | 1:2-1:4（具體情況視細胞生長速度及密度決定） |
| 傳代方法 | 1.混勻細胞，收集細胞培養(yǎng)基，900rpm離心3-5min，棄上清； 2.加新的*培養(yǎng)基輕輕重懸細胞，均勻分到新的培養(yǎng)瓶里； 3.補足*培養(yǎng)基，將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)； |
| 注意事項 | 部分懸浮細胞會附著瓶底，輕輕晃動培養(yǎng)基或者吹打細胞面就會脫落，不需要胰酶消化。建議使用培養(yǎng)皿培養(yǎng)，更適合吹打細胞操作，吹打細胞注意盡量輕柔，不要產生過多氣泡以免影響細胞狀態(tài)。 |
| 三、細胞凍存操作 | |
| 凍存液配方 | 92%FBS+8%DMSO(新手*)或92%*培養(yǎng)基+8%DMSO(高手*); |
| 凍存規(guī)格 | 200-300萬/ml，1ml每管 |
| 凍存方法 | 1.消化并離心獲得細胞沉淀后，加配置好的凍存液輕輕重懸細胞； 2.將細胞懸液盡快移入已經做好標記的凍存管； 3.將凍存管轉入程序凍存盒，放入-80度冰箱過夜，第二天轉入液氮保存；沒有程序凍存盒的實驗室，加入細胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min，再-20度靜置2h后轉入-80度過夜，第二天轉入液氮保存 |
| 注意事項 | 凍存細胞轉入液氮后及時復蘇一管檢查細胞凍存活性，若有異常，及時調整實驗方案 |
Tips：
1.細胞增殖偏慢，均為懸浮生長，大部分細胞聚集成團，少數(shù)分散的細胞，并且細胞間隙會有較多的死細胞和細胞碎片。
2.強烈建議選擇尚恩生物NK92-MI*培養(yǎng)基（貨號SNLM-195）培養(yǎng)。
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