過敏反應(yīng)通常會(huì)引起許多皮膚癥狀，比如皮膚發(fā)紅、發(fā)癢，嚴(yán)重的患者還會(huì)出現(xiàn)刺痛或者面部出現(xiàn)紅斑、風(fēng)團(tuán)、丘疹或丘皰疹等癥狀。一些醫(yī)美類化妝品除具有常規(guī)護(hù)膚功效外還能起到抗過敏作用。通過斑馬魚技術(shù)能有效評(píng)價(jià)化妝品及其原料對(duì)過敏反應(yīng)的抑制作用。
【評(píng)價(jià)原理】
過敏反應(yīng)的主要原因是過敏原/致敏因子誘導(dǎo)組織學(xué)上肥大細(xì)胞脫顆粒，釋放多種活性介質(zhì)進(jìn)而誘發(fā)各種過敏癥狀。其中類胰蛋白酶是肥大細(xì)胞內(nèi)預(yù)先合成的中性蛋白酶，是臨床上檢驗(yàn)人體是否過敏的重要指標(biāo)。斑馬魚產(chǎn)生過敏反應(yīng)時(shí)，同樣會(huì)誘導(dǎo)肥大細(xì)胞分泌類胰蛋白酶。因此，通過檢測(cè)斑馬魚整體類胰蛋白酶水平可以判斷化妝品及其原料的抗過敏作用。
【實(shí)驗(yàn)方案】
我們將受測(cè)試斑馬魚分成若干組，分別含正常對(duì)照組、模型對(duì)照組和化妝品組。其中正常對(duì)照組未經(jīng)C48/80處理，模型對(duì)照組和化妝品組都用C48/80處理（C48/80通過溶解到標(biāo)準(zhǔn)稀釋水中的方式攝入到斑馬魚體內(nèi)，C48/80是一種能讓皮膚表面產(chǎn)生過敏反應(yīng)的物質(zhì)），化妝品組另需加入相應(yīng)濃度的化妝品樣品。
處理24 h后，利用酶標(biāo)儀檢測(cè)各組吸光度值（OD值），以類胰蛋白酶的表達(dá)水平評(píng)價(jià)化妝品抗過敏作用。
此外，可以通過斑馬魚病理切片，用PAS染色后觀察腸道壁上肥大細(xì)胞的狀況反映化妝品的抗敏作用。
【結(jié)果展示】（展示圖片僅供參考，實(shí)際實(shí)驗(yàn)組別依據(jù)合同而定）
圖1. 化妝品處理后斑馬魚吸光度值
與模型對(duì)照組比較，*p < 0.05
圖2. 化妝品處理后斑馬魚的致敏作用
與模型對(duì)照組比較，*p < 0.05
可以看到，使用化妝品的濃度組類胰蛋白酶含量與模型對(duì)照組比較明顯降低。
圖3. 斑馬魚體內(nèi)肥大細(xì)胞染色典型圖（箭頭指示為肥大細(xì)胞，PAS 1000×）
從病理切片中也能看出來，模型對(duì)照組斑馬魚的腸道壁上的肥大細(xì)胞與正常對(duì)照組相比數(shù)量顯著上升，而經(jīng)色甘酸鈉和化妝品處理的斑馬魚腸道肥大細(xì)胞相對(duì)于模型對(duì)照組明顯減少。
【評(píng)價(jià)結(jié)論】
1.經(jīng)過各組斑馬魚的對(duì)比實(shí)驗(yàn)，模型對(duì)照組斑馬魚的腸道壁上的肥大細(xì)胞與正常對(duì)照組相比數(shù)量顯著上升，而經(jīng)色甘酸鈉和化妝品處理的斑馬魚腸道肥大細(xì)胞相對(duì)于模型對(duì)照組明顯減少。
2.本實(shí)驗(yàn)證實(shí)了色甘酸鈉和該化妝品具有抗過敏功效。
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