利用斑馬魚模型評價胃腸道粘膜損傷輔助保護功效
【評價原理】
近年來，各種各樣的美食迫使人們越來越關(guān)注胃腸道健康問題。斑馬魚的基因與人類基因的相似度達到87％，并擁有與人類結(jié)構(gòu)和功能相似的胃腸道組織。斑馬魚胃腸道粘膜屏障系統(tǒng)由較完整的機械屏障、化學(xué)屏障和免疫屏障構(gòu)成，與哺乳動物高度相似，可作為胃腸道粘膜屏障研究的動物模型。*磺酸（TNBS）可破壞胃腸粘膜屏障，與腸組織蛋白結(jié)合形成抗原，發(fā)生變tai反應(yīng)，誘發(fā)潰瘍性胃腸道損傷。胃腸道病變累及肌層和神經(jīng)，導(dǎo)致胃腸壁張力減退，胃腸腔擴大。胃腸道病變時出現(xiàn)炎癥反應(yīng)，中性粒細(xì)胞募集到損傷部位。杯狀細(xì)胞主要分泌黏蛋白，形成黏膜屏障以保護上皮細(xì)胞，胃腸黏膜損傷時杯狀細(xì)胞數(shù)量減少。通過病理切片可觀察胃腸道組織學(xué)改變（如潰瘍形成等）的情況。
我們評價斑馬魚胃腸道粘膜損傷輔助保護功效有4個指標(biāo)：1. 觀察胃腸腔面積；2. 應(yīng)用轉(zhuǎn)基因中性粒細(xì)胞綠色熒光斑馬魚，觀察胃腸道中性粒細(xì)胞數(shù)量；3. 應(yīng)用特異性的染料（呈藍色），觀察腸道杯狀細(xì)胞數(shù)目；4. 胃腸道病理切片。
【實驗方案】利用斑馬魚模型評價胃腸道粘膜損傷輔助保護功效
我們將受測試斑馬魚分成三組，分別是正常對照組、模型對照組和服用胃腸道粘膜輔助保護劑組。其中正常對照組未經(jīng)任何處理，模型對照組與服用胃腸道粘膜輔助保護劑組都攝入了等量的TNBS（TNBS通過溶解到養(yǎng)魚用水中的方式攝入到斑馬魚體內(nèi)）。服用胃腸道粘膜輔助保護劑組在TNBS誘導(dǎo)胃腸道粘膜損傷之后攝入常欣衛(wèi)口服液之類的胃腸道粘膜輔助保護劑。
服用一段時間胃腸道粘膜輔助保護劑后，我們觀察斑馬魚胃腸道表型，分析胃腸腔面積，胃腸道中性粒細(xì)胞數(shù)目和杯狀細(xì)胞數(shù)目，同時制作成病理切片觀察胃腸道的病理結(jié)構(gòu)變化。
【結(jié)果展示】
圖1. 斑馬魚胃腸道表型圖（藍色虛線區(qū)域為胃腸腔）
可以看到，服用胃腸道粘膜輔助保護組的胃腸腔面積與正常對照組比較相似，沒有明顯的胃腸腔擴張。
圖2. 斑馬魚胃腸道中性粒細(xì)胞表型圖（黃色虛線區(qū)域為腸腔）
可以看到，服用胃腸道粘膜輔助保護劑組的腸道中性粒細(xì)胞數(shù)量與正常對照組比較相似，沒有明顯的增多。
圖3. 斑馬魚胃腸道杯狀細(xì)胞表型圖
可以看到，服用胃腸道粘膜輔助保護劑組的腸道杯狀細(xì)胞數(shù)量與正常對照組比較相似，沒有明顯的減少。
圖4. 斑馬魚胃腸道病理切片
可以看到，服用胃腸道粘膜輔助保護劑組的胃腸粘膜形態(tài)與正常對照組比較相似，沒有明顯的胃腸腔擴張、粘膜糜爛潰瘍等癥狀。
【評價結(jié)論】
1. 經(jīng)過每組30尾斑馬魚的對比實驗，服用胃腸道粘膜輔助保護劑組的胃腸腔情況與正常對照組相似，并未出現(xiàn)模型對照組胃腸腔擴張、中性粒細(xì)胞數(shù)量增加、腸道杯狀細(xì)胞數(shù)目減少、粘膜糜爛潰瘍等情況。
2. 本實驗證實了常欣衛(wèi)口服液具有明顯胃腸道粘膜輔助保護功效。
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