檢測食品中伏馬毒素酶聯(lián)免疫檢測試劑盒

檢測食品中伏馬毒素酶聯(lián)免疫檢測試劑盒

1 原理及用途

伏馬毒素(Fumonisins)是由串珠鐮刀菌產(chǎn)生的真菌毒素，目前已知有28種衍生物，其中以伏馬毒素B1（FB1）zui為普遍，研究也zui為深入，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)玉米及其制品，如動物飼料均易被FB1造成污染。FB1毒性在伏馬毒素中zui強，對多種動物有較嚴(yán)重的毒理作用。研究表明FB1可引發(fā)馬的白腦軟化癥，豬的肺水腫綜合癥，此外，還可誘發(fā)人類的食道癌和肝癌、胃癌等疾病，對畜牧業(yè)和人類的健康構(gòu)成危害。

試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、辣根酶標(biāo)記物、抗體、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成。檢測時，加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液，樣本中的伏馬毒素B1和酶標(biāo)板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競爭抗伏馬毒素B1抗體，加入酶標(biāo)記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光度值與其所含伏馬毒素B1含量成負相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較乘以樣本稀釋倍數(shù)即可得出樣本中伏馬毒素B1的殘留量。

2 技術(shù)指標(biāo)

2.1 試劑盒靈敏度：0.5ppb(ng/ml)

2.2 反應(yīng)模式：25℃，30min～15min

2.3 檢測下限：

玉米、飼料…………………………50ppb

食用油………………………………10ppb

2.4 交叉反應(yīng)率：

伏馬毒素B1…………………………100%

 2.5 樣本回收率：

飼料…………………………………95±15%

玉米…………………………………100±15%

食用油………………………………85±15%

3 試劑盒組成

酶標(biāo)板……………………………96孔

標(biāo)準(zhǔn)液（黑蓋）：各1ml

0ppb、0.5ppb、1.5 ppb、4.5ppb、13.5ppb、40.5ppb

酶標(biāo)記物（紅蓋）…………………5.5ml

抗體工作液（藍蓋）………………5.5ml

底物液A（白蓋）……………………6ml

底物液B（黑蓋）……………………6ml

終止液（黃蓋）………………………6ml

10X濃縮復(fù)溶液（黃蓋）……………50ml

20X濃縮洗滌液（白蓋）……………40ml

說明書………………………………1份

4 需要的器材和試劑

4.1 儀器：酶標(biāo)儀、打印機、均質(zhì)器 、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平（感量0.01g）

4.2 微量移液器：單道20µl-200µl，100µl-1000µl、多道300µl

4.3 試劑：甲醇

5 樣本前處理

5.1 樣本處理前須知：

實驗器具必須潔凈并使用一次性吸頭，以避免污染干擾實驗結(jié)果。

5.2 配液：

配液1：樣本提取液

70%甲醇，即V甲醇:V去離子水=7：3。

配液2：復(fù)溶液

將10×濃縮復(fù)溶液用去離子水10倍稀釋（1份10×濃縮復(fù)溶液加9份去離子水），復(fù)溶液在4℃環(huán)境可保存一個月。

配液3：1×工作洗滌液

將濃縮洗滌液20倍稀釋(1份洗滌液加19份去離子水)。

5.3 樣本前處理步驟：

5.3.1 玉米、飼料處理方法

1）稱取1g粉碎樣品于50ml離心管中，加5ml樣品提取液，振蕩5分鐘，室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘；

2）取上清0.1ml，加入1.9ml復(fù)溶液，振蕩2分鐘；

3）取50μl進行分析。

樣本稀釋倍數(shù)：100   檢測下限：50ppb

（若樣本中伏馬毒素B1的含量較高，可在步驟2）按比例增大稀釋倍數(shù)，檢測出的含量乘以樣本實際的稀釋倍數(shù)即為樣本中的含量）

5.3.1 食用油處理方法

1）稱取5ml樣品于50ml離心管中，加8ml正己烷和5ml樣品提取液，振蕩5分鐘，室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘；

2）去除上層液體，取100ul下層液體加入1.9ml復(fù)溶液，混勻；

3）取50μl進行分析。