合成多肽方法分類
多肽的合成主要分為兩條途徑:化學(xué)合成多肽和生物合成多肽。
化學(xué)合成主要是以氨基酸與氨基酸之間縮合的形式來進(jìn)行。在合成含有特定順序的多肽時(shí)，由于多肽合成原料中含有官能度大于2的氨基酸單體，多肽合成時(shí)應(yīng)將不需要反應(yīng)的基團(tuán)暫時(shí)保護(hù)起來，方可進(jìn)行成肽反應(yīng)，這樣保證了多肽合成目標(biāo)產(chǎn)物的定向性。多肽的化學(xué)合成又分為液相合成和固相合成。
多肽液相合成主要分為逐步合成和片段組合兩種策略。逐步合成簡(jiǎn)潔迅速，可用于各種生物活性多肽片段的合成。片段組合法主要包括天然化學(xué)連接和施陶丁格連接。近年，多肽液相片段合成法發(fā)展迅速，在多肽和蛋白質(zhì)合成領(lǐng)域已取得了重大突破。在多肽片段合成法中，根據(jù)多肽片段的化學(xué)特定性或化學(xué)選擇性，多肽片段能夠自發(fā)進(jìn)行連接，得到目標(biāo)多肽。因?yàn)槎嚯钠魏械陌被釟埢鄬?duì)較少，所以純度較高，且易于純化。
多肽的生物合成方法主要包括發(fā)酵法、酶解法，隨著生物工程技術(shù)的發(fā)展，以DNA重組技術(shù)為主導(dǎo)的基因工程法也被應(yīng)用于多肽的合成。
合成多肽的原理
多肽合成就是如何把各種氨基酸單位按照天然物的氨基酸排列順序和連接方式連接起來。由于氨基酸在中性條件下是以分子內(nèi)的兩性離子形式(H3+NCH(R)COO-)存在，因此，氨基酸之間直接縮合形成酰胺鍵的反應(yīng)在一般條件下是難于進(jìn)行的。
氨基酸酯的反應(yīng)活性較高。在100℃下加熱或者室溫下長(zhǎng)時(shí)間放置都能聚合生成肽酯，但反應(yīng)并沒有定向性，兩種氨基酸a1和a2的酯在聚合時(shí)將生成a1a2…、a1a1…、a2a1…等各種任意順序的混合物。
為了得到具有特定順序的合成多肽，采用任意聚合的方法是行不通的，而只能采用逐步縮合的定向多肽合成方法。一般是如下式所示，即先將不需要反應(yīng)的氨基或羧基用適當(dāng)?shù)幕鶊F(tuán)暫時(shí)保護(hù)起來，然后再進(jìn)行連接反應(yīng)，以保證多肽合成的定向進(jìn)行。
式中的X和Q分別為氨基和羧基的保護(hù)基，它不僅可以防止亂接副反應(yīng)的發(fā)生，還具有能消除氨基酸的兩性離子形式，并使之易溶于有機(jī)溶劑的作用。
Q在有的情況下也可以不是共價(jià)連接的基團(tuán)，而是由有機(jī)強(qiáng)堿(如三乙胺)同氨基酸的羧基氫離子組成的有機(jī)陽離子。Y為一強(qiáng)的吸電子基團(tuán)，它能使羧基活化，而有利于另一氨基酸的自由氨基，對(duì)其活化羧基的羧基碳原子進(jìn)行親核進(jìn)攻生成酰胺鍵。
由此所得的連接產(chǎn)物是N端和C端都帶有保護(hù)基的保護(hù)肽，要脫去保護(hù)基后才能得到自由的肽。如果肽鏈不是到此為止，而是還需要從N端或C端延長(zhǎng)肽鏈的話，則可以先選擇性地脫去X或Q，然后再同新的N保護(hù)氨基酸(或肽)或C保護(hù)的氨基酸(或肽)進(jìn)行第二次連接，并依次不斷重復(fù)下去，直到所需要的肽鏈長(zhǎng)度為止。
對(duì)于長(zhǎng)肽的多肽合成來說，一般有逐步增長(zhǎng)和片段縮合兩種伸長(zhǎng)肽鏈的方式，前者是由起始的氨基酸(或肽)開始。每連接一次，接長(zhǎng)一個(gè)氨基酸，后者則是用N保護(hù)肽同C保護(hù)肽縮合來得到兩者長(zhǎng)度相加的新的長(zhǎng)肽鏈。
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