兔尿游離皮質(zhì)醇(UFC) ELISA 試劑盒
操作步驟
1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2. 設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；
3. 樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加。
4. 除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。
6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。
兔尿游離皮質(zhì)醇(UFC) ELISA 試劑盒
Elisa試驗操作中可能影響結(jié)果的原因及其相應的解決辦法
1 選擇試劑 選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑，嚴格按照試劑說明書進行操作，操作前將試劑在室溫下平衡至少30分鐘。
2 加樣 可能原因： 1）血清或血漿標本分離不好即進行加樣； 2）手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時)； 3）加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。解決辦法： 1） 標本為血清：將血液先自然存放1-2小時后，再用3000rmp離心15分鐘；標本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內(nèi)檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。 2) 加樣后及時放入孵箱。 3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。 4) 如果采用AT或其他全自動加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 5) 標本較多時，請分批操作。
3 孵育 可能原因： 1) 孵育時未貼封片或加蓋，使標本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗*； 2) 孵育時間人為延長，導致非特異性結(jié)合緊附于反應孔周圍，難以清洗*。解決辦法： 1) 貼封片或加蓋； 2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板 可能原因： 1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。 2) 采用半自動洗板機洗板時，洗液量不足，導致洗板不*；洗板針堵塞，抽吸不*；洗板不暢，導致洗板效果差。 3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法： 1) 保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙（選擇干凈、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍干； 2) 合理安排，或多用幾臺洗板機。
5 顯色 可能原因： 1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑； 2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法： 1) 顯色劑盡量在臨用前配制，堅持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用； 2) 加樣時保持顯色劑不外流； 3) A、B液應避免接觸金屬器械。
6 終止 可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡，導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板 如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。
在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸；盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標準自動化，有效提高檢測質(zhì)量。在實際操作中，除了選擇優(yōu)良試劑外，必須嚴格按照操作步驟進行操作，同時做好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評，以嚴謹?shù)墓ぷ髯黠L檢測每一份標本，才能保證檢測質(zhì)量。
ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點得到了廣泛的應用，但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大，如不注意，有可能導致顯色不全、花板等結(jié)果。我公司將操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期提高試驗質(zhì)量。
兔尿游離皮質(zhì)醇(UFC) ELISA 試劑盒
篤瑪生物關(guān)于試劑盒的優(yōu)勢：
1.高效，靈敏，特異的抗體
2.穩(wěn)定的重復性和可靠性
3.吸附性能好，空白值低，孔底透明度高和固相載體
4.適用血清，血漿，組織勻漿液，細胞培養(yǎng)上清液，尿液等多種標本類型
~上海篤瑪生物科技有限公司是一家從事生物學試劑及試劑盒的高科技生物企業(yè)。
總部位于上海，并在全國設有經(jīng)銷或代理機構(gòu)。產(chǎn)品因可靠而穩(wěn)定的質(zhì)量和較為*的售后服務確立了“篤瑪生物”良好的品牌形象。公司秉承“以客戶為中心、以產(chǎn)品為保障、以誠信為基礎(chǔ)、以創(chuàng)新為宗旨”的發(fā)展理念，擁有專業(yè)的研發(fā)和質(zhì)量檢測團隊以及*的倉儲和物流系統(tǒng)。“篤瑪生物”已經(jīng)得到全國科研工作者的認可，成為廣大經(jīng)銷商推崇的。
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