Bradford法蛋白定量試劑盒

Bradford Protein Assay Kit

貨號：PD-Cog-1000

組分：1000毫升染色液一瓶，5 mg/ml BSA四支。

保存：4度避光，密封保存，一年有效。

試劑盒原理：

在酸性環(huán)境中，蛋白質(zhì)結(jié)合考馬斯亮藍G250染料，導致染料的maximal吸收發(fā)生位移，從紅棕色形式（maximal吸收峰 465nm）轉(zhuǎn)化為藍色形式（maximal吸收峰 610nm）。這兩種形式在 595nm 處光吸收差異maximal，因此 595nm 是測定考馬斯染料-蛋白復(fù)合物的藍色的best波長?；诳捡R斯染料的蛋白質(zhì)檢測法中，顏色的形成是與某些堿性氨基酸有關(guān)，范德華力和疏水相互作用也影響染料-蛋白質(zhì)的結(jié)合。結(jié)合到每個蛋白質(zhì)分子上的考馬斯染料分子數(shù)大致與蛋白所帶正電荷的數(shù)量成正比。游離氨基酸、肽和低分子量蛋白質(zhì)不會與考馬斯染料試劑產(chǎn)生顏色，肽或蛋白質(zhì)的分子量必須大于 3,000 道爾頓才能被檢出。

與BCA法和Lowry法相比，Bradford法測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學物質(zhì)的影響，尤其是還原試劑的影響，但是受去垢劑的影響較大。常見物質(zhì)的兼容性參考兼容物列表。

使用Bradford法蛋白定量試劑盒檢測BSA蛋白時，線性擬合范圍可低達約30 μg/ml，即相當于0.15 μg的BSA蛋白，檢測濃度上限可達到5 mg/ml以上，主要受讀數(shù)所用儀器的檢測范圍限制。不同蛋白由于氨基酸組成不同，與染料結(jié)合后的吸光值有差異，線性范圍會有所變動。由于染料與蛋白結(jié)合前后的吸收光譜有重疊，因此直接使用OD595（在595 nm的光吸收值）線性擬合，得到的是一個直徑很大的曲線，可近似看作直線，在蛋白的濃度跨度較大時，線性度下降。使用OD595/OD470的比值（在595 nm和470 nm的光吸收值之比）能更好地擬合反應(yīng)過程，得到的是一條直線，可在一定程度上提高檢測靈敏度。

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