車間空氣滅菌臭氧發(fā)生器投加量及效果驗證方法
藥廠車間臭氧滅菌效果驗證：
首先看臭氧發(fā)生器使用是否正常；機器開機是否正常；再看使用環(huán)境是否密閉；臭氧投送是否能到位；有沒從旁路泄漏；其次再計算車間的臭氧投加量是否足量；臭氧投加一般建議宜多不宜少；因為臭氧容易衰減；這是臭氧的特性；沒有辦法改變。如果都沒有問題再看驗證方法是否正確。
一；臭氧發(fā)生器滅菌效果達不到要求請按以下幾步檢測：
1：車間密閉性是否良好；車間物料是否放置過多；物料放置過多會損耗大部分臭氧；直接影響臭氧濃度的提高；
2：臭氧發(fā)生器啟動工作后；*空調是否在工作；
3：臭氧發(fā)生器工作時；*空調是否有換氣；在用臭氧發(fā)生器時*空調送風系統(tǒng)必須是采用內循環(huán)；如果在臭氧滅菌時間是采用向外換氣是會把車間臭氧排掉的；導致車間臭氧濃度沒辦法升高；
4：臭氧發(fā)生器的冷卻水是否按標示連接進水和出水的；開機時；冷卻水是否接通有流動的水流動；臭氧發(fā)生器的濃度調節(jié)閥是否打到了*；臭氧發(fā)生器的流量是否調節(jié)在4~5L之間；
5：臭氧發(fā)生器投加量是否計算正確；計算方法如下：
·衛(wèi)生消毒界習慣用ppm做單位。即體積百萬分之一。對于空氣中的臭氧，1ppm=2.14mg/M3。
如果車間臭氧濃度要達到20ppm；換算出來則是20*2.14＝42.8mg/m3;建議按50mg/m3投加；如果車間滅菌要求達到10ppm；換算出來則是10*2.14＝21.4mg/m3;建議按22~25mg/m3投加臭氧。
　利用HVAC系統(tǒng)集中投加時，臭氧發(fā)生器選用按以下方法計算：首先計算實際臭氧消毒體積，實行體積由三部分組成V=V1+V2+V3，V1潔凈區(qū)空間體積，V2空氣凈化系統(tǒng)體積，V3循環(huán)時空氣損失體積，實際計算過程中V3等於循環(huán)系統(tǒng)總風量(及補新風風量)的1.1%。根據(jù)《消毒技術規(guī)范》的標準確定臭氧滅菌的投加量(g/h)，車間如果臭氧濃度按20ppm計算；則臭氧投加量是42.8mg/m3;如果車間物料放置過多；按此投加量檢測臭氧濃度會有所偏差；偏差范圍約3~5ppm; 如有必要再考慮臭氧機投送臭氧管道及其它因素影響（臭氧發(fā)生器使用的環(huán)境溫度、濕度）；在正常使用狀態(tài)下忽略不計。
　　w=c*v/s w：實際選用臭氧發(fā)生器的產(chǎn)量，單位為g/h；c：單位體積投加量
　　v：實際臭氧消毒體積s：臭氧衰退系數(shù)0.4208
　　如藥廠為空氣滅菌，潔凈室所需臭氧濃度定為c=20ppm，但事實上，潔凈區(qū)的消毒不僅是對空氣的消毒，實際上還包括物體表面的消毒。
　　工程技術參數(shù)
V1=消毒面積S=車間長*車間寬*車間標高H=車間總的m3
V2＝*空調投送風管總的體積m3＝*空調投送風管的長*高*深
　V3=車間送風量m3/h+補新風風量m3/h=總循環(huán)風量*1.1%＝空氣損失體積m3
實際臭氧消毒體積V=V1+V2+V3
　所需臭氧投加量W=C*V/S
下面舉一實例：
如一個藥廠藥劑內包車間的長是55米；寬是15米；高是3米；*空調循環(huán)風量是35000立方；*空調投送風管總體積是65立方；要求達到20ppm;導入公式如下：
V1=車間長55米*車間寬15米*車間高3米＝2475m3
V2＝車間風管體積65m3
V3＝*空調循環(huán)風量*1.1%＝35000m3*1.1%＝*空調風量損失體積385m3;
實際臭氧消毒體積V=V1+V2+V3=2475m3+65m3+385m3=2925m3
　 所需臭氧投加量W=C*V/S c為臭氧投加量 20ppm 換算成mg/m3為20*2.14＝42.8mg/m3
導入數(shù)據(jù)：
所需臭氧投加量W=C臭氧投加量42.8mg/m3*V實際臭氧消毒體積2925m3/臭氧衰減系數(shù)0.4208
＝42.8mg/m3*2925m3÷0.4208
＝297.5克
如果臭氧投加量計算錯誤是不能以增加開機時間來增加臭氧濃度及滿足滅菌要求的；在臭氧投加量計算出入不是很大的情況下；延長開機時間在臭氧的持續(xù)作用下；是能滿足殺菌要求的；但臭氧濃度是不會因延長開機時間而增加臭氧濃度的。
譬如一個50立方的車間；經(jīng)過計算是選用一臺5克的臭氧發(fā)生器開機一小時可以滿足滅菌要求；臭氧濃度檢測可以達到10ppm以上；但把這臺5克的臭氧發(fā)生器用在一間500立方的車間；不是說開機10小時也是能滿足滅菌要求的；臭氧濃度也不是和延長開機時間成正比的；不是說這臺5克的機器在50立方的車間開了10小時后臭氧濃度就能上升到100ppm;也許你開上100小時也不能滿足500立方的車間滅菌。
二；臭氧滅菌效果檢測方法
1：用臭氧檢測儀檢測；臭氧發(fā)生器開機1小時進入滅菌車間檢測臭氧濃度；停機后再進去檢測是不準確的；如果不是內循環(huán)的*空調；是每小時往車間外換氣10~20次的*空調則用臭氧發(fā)生器消毒殺菌后只能檢測車間沉降菌。
2：車間沉降菌檢測方法：
名稱：潔凈區(qū)微生物檢測操作規(guī)程
關鍵詞：潔凈區(qū)、微生物檢測
目 的：規(guī)范潔凈區(qū)微生物檢測
背景知識：略
原理：略
適用范圍：100級、1萬、10萬、30萬級潔凈區(qū)環(huán)境(制藥廠按A B C D級)。

1. 沉降菌檢測
   1. 在萬級潔凈區(qū)內的關鍵操作點和潔凈室內每周檢測一次沉降菌和浮游菌；在10萬級潔凈區(qū)內其檢測頻次為每月檢測一次。30萬級每季度檢測一次沉降菌。
   2. 由微生物檢測員按培養(yǎng)基的配制操作規(guī)程的要求配制肉湯瓊脂培養(yǎng)基，培養(yǎng)皿使用Φ90mm×15mm，于121℃濕熱滅菌20分鐘，取出備用。
   3. 做好潔凈區(qū)消毒工作，開啟潔凈區(qū)凈化空調系統(tǒng)，正常運行不少于30分鐘；對單向流如100級的凈化工作臺和層流罩要在凈化系統(tǒng)運行10min后開始。
   4. 靜態(tài)測試在除測試人員外，室內無生產(chǎn)人員的情況下進行，動態(tài)測試在已處于正常生產(chǎn)狀態(tài)下進行。
   5. 采樣點布置選用對角線法，要求布置地面四個方向，工作線上左右，關鍵設備頂上放置一個。
   6. 萬級、10萬級、30萬級的zui少采樣點數(shù)可按下表確定。

在滿足zui少測點數(shù)的同時，還宜滿足zui少培養(yǎng)皿數(shù)，見下表

1. 百級區(qū)只有凈化工作臺下的局部范圍，其面積小于10m2，因此百級區(qū)取樣點至少為3個。
2. 測試人員按潔凈室級別規(guī)定的程序更換潔凈服進入潔凈區(qū)；靜態(tài)測試時，室內人員不得多于2人。
3. 將制備好的肉湯瓊脂培養(yǎng)基按采樣點布點位置離地0.8～1.5m處放置，打開培養(yǎng)皿蓋，暴露30分鐘，檢測人員及時填寫記錄，記錄房間溫濕度，壓差及測試狀態(tài)。
4. 蓋好皿蓋，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱內，在30～35℃中培養(yǎng)48小時，并用3只培養(yǎng)皿作對照。
5. 用透射光于培養(yǎng)皿背面或正面仔細觀察平皿上所有菌落數(shù)，要注意菌落與培養(yǎng)基沉淀物的區(qū)別，然后用5～10倍放大鏡檢查有否遺漏。
6. 計算平均菌落數(shù) =（M1＋M2……＋Mn）／n，式中 M1：1號培養(yǎng)皿菌落數(shù)，M2：2號培養(yǎng)皿菌落數(shù)，n： 培養(yǎng)皿數(shù)。
7. 用平均菌落數(shù)判斷潔凈室空氣中的微生物， 潔凈區(qū)的平均菌落數(shù)（靜態(tài)測試）：100級≤1個/皿，萬級≤3個／皿，10萬級≤10個／皿，30萬級≤15個／皿。
8. 如超過標準，則必須對此區(qū)域重新消毒，重新采樣兩次，測試結果均須合格；否則要向質量管理部通報，并采取相應的措施。
9. 檢測人員必須向QA部門發(fā)“潔凈級別檢測記錄”，取樣和微生物培養(yǎng)及檢測人員均要在記錄上簽名，QA部門主管審核，記錄由質量管理部保存三年。

1. 浮游菌檢測
   1. 對萬級和10萬級潔凈區(qū)要進行浮游菌的檢測，在萬級區(qū)內的關鍵操作點和潔凈室內每周檢測一次，10萬級潔凈區(qū)內其檢測頻次為每月檢測一次。
   2. 浮游菌取樣使用浮游菌采樣器，采樣器必須要有流量計和定時量，并按儀器的檢定周期，定期對儀器作檢定，以保證測試數(shù)據(jù)的可靠性。
   3. 采樣器進入被測房間前要先用消毒劑滅菌，用于100級潔凈室的采樣器是一直放在房間內；采樣時使用規(guī)定為Φ150mm×15mm培養(yǎng)皿。
   4. 由微生物檢測人員按《培養(yǎng)基的配制操作規(guī)程》的要求配制營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，于121℃濕熱滅菌20分鐘，取出備用。
   5. 浮游菌取樣與沉降菌一樣可分為靜態(tài)測試和動態(tài)測試兩種狀態(tài)；各種潔凈度的采樣點數(shù)目和zui小采樣量如下表所示。

浮游菌取樣點數(shù)目及zui小采樣量

1. 采樣點布點位置離地0.8～1.5m處放置，送風口測點位置離開送風面30cm左右；可在關鍵設備或關鍵工作活動范圍增加測點；采樣點的布置與5)相同。
2. 對單向流如l00級凈化工作臺，測試要在凈化空調系統(tǒng)正常運行不少于l0min后開始；對非單向流，如緩沖室、培養(yǎng)室，測試要在凈化空調系統(tǒng)正常運行不少于30min后開始。
3. 采樣者必須穿戴與被測潔凈區(qū)域相應的工作服，在轉盤上放入或調換培養(yǎng)皿前，雙手要用消毒劑消毒；培養(yǎng)皿表面必須嚴格消毒。
4. 采樣口及采樣管在使用前必須高溫滅菌，要用消毒劑消毒采樣器的頂盤，轉盤以及罩子的內外面；對采樣管的外壁和內壁進行消毒后，要將管中的殘留液倒掉并晾干。
5. 儀器經(jīng)消毒后先不放入培養(yǎng)皿，先接通電源，啟動真空抽氣泵抽氣不少于5min，使儀器中的殘余消毒劑蒸發(fā)。
6. 調好流量，轉盤轉速，已知采樣器的流量（L/min ），設定采樣時間(min)，相乘即采樣量(L)；關閉真空泵。
7. 檢查每個培養(yǎng)皿的質量，培養(yǎng)基及培養(yǎng)皿有變質、破損或污染的不能使用，放入培養(yǎng)皿，蓋上蓋子后調節(jié)采樣器縫隙高度。
8. 對于單向流或逆風口，采樣器采樣管口朝向應正對氣流方向，對于非單向流采樣管口向上，布置采樣點時，至少應離開塵粒較集中的回風口lm以上。
9. 除百級區(qū)外，在其他潔凈室采樣時，要在送風口和關鍵部位各進行一次采樣，每個采樣點只采樣一次。
10. 置采樣口于采樣點后，開啟采樣器，采樣時，測試人員要站在采樣口的下風側，靜態(tài)測試時，室內人員不得多于2人。
11. 采樣結束后取出培養(yǎng)皿，蓋上皿蓋并編號，注意防止采樣管對樣本的污染；要用消毒劑噴射罩子的內壁和轉盤，將采樣過程記錄在“潔凈級別檢測記錄”上。
12. 全部采樣結束后，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中30℃~35℃培養(yǎng)48h；每批培養(yǎng)基可選3只培養(yǎng)皿作對照培養(yǎng)，檢驗培養(yǎng)基本身是否污染。
13. 用肉眼直接計數(shù)，標記或菌落計數(shù)器上點計，然后用500倍放大鏡檢查，有否遺漏，若平板上有2個或2個以上的菌落重疊，可分辨時仍以2個或2個以上菌落計數(shù)。
14. 浮游菌評定標準：100級≤5/m3，萬級≤100/m3，10萬級≤500/m3
15. 微生物檢測人在“潔凈級別檢測記錄”上記錄檢測數(shù)據(jù)，并交QA部門主管審批，每個測點的浮游菌平均濃度必須低于設定的潔凈度標準的規(guī)定。
16. 若某測點的浮游菌平均濃度超過評定標準，則必須對此區(qū)域先行消毒，然后重新取樣兩次，兩次測試結果必須合格；否則要向質量管理部通報，并要采取相應的措施。

參考：公司GMP文件，參考GB /T16292-1996、GB /T16293-1996、GB /T16294-1996