抗游離PSA單克隆抗體   Anti-Free-PSA McAb(coating)

特異性IgG抗體的制備

在標(biāo)記的免疫測(cè)定或其他技術(shù)中將特異性抗體純化出來(lái)，是極為重要的。例如在ELISA，用于包被的抗體一定要用特異性IgG，才能得到良好的效果。這是因?yàn)槿逯杏写罅糠强贵w蛋白，如白蛋白、α1和α2球蛋白等，如不除去，會(huì)干擾包被。再如反相間接血凝，致敏紅細(xì)胞的抗體也需用特異性IgG的I(ab')2才能使實(shí)驗(yàn)滿(mǎn)意。特異性IgG和F(ab')2的制備方法有如下幾種。

一.粗提法提取球蛋白

大多用硫酸銨鹽析法或*鹽析法。硫酸銨鹽析須經(jīng)過(guò)多次沉淀，*次用40％飽和度，第二次用35％飽和度，第三次用33％飽和度，經(jīng)三次提取后的γ球蛋白基本是IgG成分。*法更簡(jiǎn)便，用20％即可將γ球蛋白沉淀出來(lái)。經(jīng)鹽析后的γ球蛋白雖大多屬于IgG，但還有5％其他區(qū)帶蛋白，如γ區(qū)的雜蛋白。又因IgG組分中還含其他所謂正常的IgG，產(chǎn)生干擾。因此鹽析法粗提的γ球蛋白只能用于一般的實(shí)驗(yàn)，或者是抗體效價(jià)較高的抗血清。

抗游離PSA單克隆抗體   Anti-Free-PSA McAb(coating)

二.離子交換層析法提取IgG

常用的離子交換劑有DEAE纖維素或QAE纖維素，以QAE-Sephadexzui為理想，DE22、32、52也可應(yīng)用。取QAE-SephadexA25或A50經(jīng)酸處理并在0.05mol/LpH7.5～8.6的磷酸鹽緩沖液中平衡，將水分抽干，稱(chēng)濕重Ig加于10ml血清中，在室溫30min后，離心或過(guò)濾除去離子交換劑。上清液再如此處理一次，即獲得較純的IgG，甚至不含其他雜蛋白。用該技術(shù)純化IgG簡(jiǎn)便，不損壞抗體，既可小量提取，也可大量制備。

三.親和層析法提取特異性IgG

將純化抗原或粗制抗原（如是單價(jià)特異性則對(duì)抗原要求不高）交聯(lián)Sepharose4B制成親和層析柱，將抗血清過(guò)柱后洗去未結(jié)合的雜蛋白，再用硫氰酸鉀洗脫，流出的是純的特異性IgG抗體。因硫氰酸鉀對(duì)抗體有破壞作用，應(yīng)及時(shí)透析除去。純化的IgG因含量低，失去保護(hù)作用，應(yīng)及時(shí)應(yīng)用或凍干保存，亦可20℃保存，但皆不理想；加入三乙醇胺或甘油可起保護(hù)作用。

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四.酶解法制備F(ab')2片段

胃蛋白酶對(duì)IgG的作用點(diǎn)是在連接兩重鏈的二硫鍵靠C端處（232氨基酸處），結(jié)果兩

小鼠抗心磷脂抗體IgA(ACA-IgA)ELISA試劑盒    96T/48T
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