內皮型一氧化氮合成酶（eNOS）試劑盒高品質elisa試劑盒，齊一生物科技有限公司提供的試劑盒受到了廣大科研單位的*肯定和認同.*保證，價格公道，傾力為國內外科研院校實驗室提供的產品.若有需要，我司將竭誠為您服務

內皮型一氧化氮合成酶（eNOS）試劑盒ELISA試劑盒操作步驟
ELISA試劑盒使用前,將所有試劑充分混勻.不要使液體產生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差.
根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù).每個標準品和空白孔建議做復孔.每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復孔的盡量做復孔.標本用標本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應孔內.
加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內.立即加入50ul的生物素標記的抗體.蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時.
甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干.重復此操作3次.如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次.
每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘.
甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干.重復此操作3次.如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次.
每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘.避免光照.
取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果.
在450nm波長處測定各孔的OD值.
ELISA操作步驟
酶聯(lián)免疫吸附實驗材料,試劑,溶液
1．酶標板,100μltip頭,1mlEp管,濕盒
2．包被稀釋液（0.05mol/L碳酸鈉-碳酸氫鈉buffer,pH9.6）
碳酸鈉0.15g,碳酸氫鈉0.29g,疊氮鈉0.02g,加雙蒸水100ml,調pH9.6
3.封閉液(5%小牛血清/PBS溶液)
小牛血清5ml,1*PBS(pH7.4)95ml
4.洗滌液(PBST,pH7.4)
NaCl0.8g,KH2PO40.02g,Na2HPO4.12H2O0.29g,KCl0.02g,Tween200.05ml,疊氮鈉0.01g,加雙蒸水100ml,調pH7.4
5.樣本稀釋液(PBS,pH7.4)
NaCl0.8g,KH2PO40.02g,Na2HPO4.12H2O0.29g,KCl0.02g,疊氮鈉0.01g,加雙蒸水100ml,調pH7.4
6.酶標第2抗體(羊抗兔)稀釋范圍1:5,000-1:100,000
7.底物液(TMB-*尿素溶液)
①底物液A:TMB20mg,無水乙醇10ml,加雙蒸水100ml.
②底物液B(0.1mol/L檸檬酸-0.2mol/L磷酸二氫鈉緩沖液,pH5.0-5.4)
Na2HPO41.46g,檸檬酸0.933g,0.75%*尿素0.64ml,加三蒸水100ml,調pH5.0-5.4
③底物A和B按1:1混合即成TMB-*尿素溶液.
8.終止液(2mol/LH2SO4溶液)雙蒸水200ml,濃硫酸34ml,(緩慢滴加并不斷攪拌),加雙蒸水300ml
9.0.9%生理鹽水

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