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ELISA試劑盒操作步驟
ELISA試劑盒使用前,將所有試劑充分混勻.不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時(shí)加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差.
根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù).每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔.每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔.標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi).
加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi).立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體.蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時(shí).
甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干.重復(fù)此操作3次.如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次.
每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘.
甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干.重復(fù)此操作3次.如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次.
每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘.避免光照.
取出酶標(biāo)板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果.
在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值.
ELISA操作步驟
酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)材料,試劑,溶液
1．酶標(biāo)板,100μltip頭,1mlEp管,濕盒
2．包被稀釋液（0.05mol/L碳酸鈉-碳酸氫鈉buffer,pH9.6）
碳酸鈉0.15g,碳酸氫鈉0.29g,疊氮鈉0.02g,加雙蒸水100ml,調(diào)pH9.6
3.封閉液(5%小牛血清/PBS溶液)
小牛血清5ml,1*PBS(pH7.4)95ml
4.洗滌液(PBST,pH7.4)
NaCl0.8g,KH2PO40.02g,Na2HPO4.12H2O0.29g,KCl0.02g,Tween200.05ml,疊氮鈉0.01g,加雙蒸水100ml,調(diào)pH7.4
5.樣本稀釋液(PBS,pH7.4)
NaCl0.8g,KH2PO40.02g,Na2HPO4.12H2O0.29g,KCl0.02g,疊氮鈉0.01g,加雙蒸水100ml,調(diào)pH7.4
6.酶標(biāo)第2抗體(羊抗兔)稀釋范圍1:5,000-1:100,000
7.底物液(TMB-*尿素溶液)M9 Minimal Medium Salts (Maniatis Formulation) (Powder)    M9培養(yǎng)基    227 g(0.5lb)
M9 Minimal Medium Salts (Part A) (Includes Part B #3036-022)(Powder)    M9培養(yǎng)基    450 g
M9 Minimal Medium Salts (Maniatis Formulation) (Powder)    M9培養(yǎng)基    454 g(1lb)
M9 Minimal Medium Salts (Maniatis Formulation) (Powder)    M9培養(yǎng)基    1 kg(2.2lb)
M9 Minimal Medium Salts (Maniatis Formulation) (Powder)    M9培養(yǎng)基    5 kg(11lb)
SOC Media Kit,  Part A & B    SOC培養(yǎng)基試劑盒    1 each
SOB-Nacl (Powder)    SOB-Nacl    227 g(0.5lb)
SOC Media (Sterile Solution)    SOC培養(yǎng)基    10 ml
LB-Agar Medium W/ 34 ug/ml Chloramphenicol, 1% Glucose. (Sleeve)(Plates)    LB 瓊脂，34 ug/ml 氯霉素, 1% 葡萄糖    10x100 mm
LB-Agar Medium W/30 ug/ml Kanamycin,  40 ug/ml X-Gal, 0.5mM IPTG (Sleeve)(Plates)    LB 瓊脂，30 ug/ml 卡那霉素,  40 ug/ml X-Gal, 0.5mM IPTG    10x100 mm
LB-Agar Medium W/100 ug/ml Kanamycin, 40 ug/ml X-Gal, 0.5mM IPTG (Sleeve)(Plates)    LB 瓊脂，100 ug/ml 卡那霉素, 40 ug/ml X-Gal, 0.5mM IPTG    10x100 mm
LB-Agar Medium W/50 ug/ml Ampicillin, 30 ug/ml Kanamycin (Sleeve)(Plates)    LB 瓊脂，50 ug/ml 氨芐青霉素, 30 ug/ml 卡那霉素    10x100 mm
LB-Agar Medium W/75 ug/ml Ampicillin (Case)(Plates)    LB 瓊脂，75 ug/ml 氨芐青霉素    100x100 mm
LB-Agar Medium W/75 ug/ml Ampicillin (Sleeve)(Plates)    LB 瓊脂，75 ug/ml 氨芐青霉素    10x100 mm
LB-Agar Medium W/25 ug/ml Chloramphenicol, 40 ug/ml X-Gal, 0.5mM IPTG (Case)(Plates)    LB 瓊脂，25 ug/ml 氯霉素, 40 ug/ml X-Gal, 0.5mM IPTG    100x100 mm
LB-Agar Medium W/25 ug/ml Chloramphenicol, 40 ug/ml X-Gal, 0.5mM IPTG (Sleeve)(Plates)    LB 瓊脂，25 ug/ml 氯霉素, 40 ug/ml X-Gal, 0.5mM IPTG    10x100 mm