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操作步驟:
1.包被過(guò)程(注意設(shè)置空白對(duì)照,陰性對(duì)照):
將所用抗原用包被稀釋液稀釋到適當(dāng)濃度(一般所需抗原包被量為每孔20-200μg),每孔抗原加入100μl,置37℃,4h,或4℃,24h;棄去孔中液體.(為避免蒸發(fā),板上應(yīng)加蓋或?qū)迤椒旁诘撞坑袧窦啿嫉慕饘贊窈兄?
2.封閉酶標(biāo)反應(yīng)孔:
5%小牛血清置37℃封閉40min.封閉時(shí)將封閉液加滿各反應(yīng)孔,并去除各孔中的氣泡,封閉結(jié)束后用洗滌液滿孔洗滌3遍,每遍3min.
洗滌方法:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,將洗滌液注滿板孔,放置2min略作搖動(dòng),吸干孔內(nèi)液,傾去液體后在吸水紙上拍干
洗滌次數(shù)3次
3.加入待檢測(cè)樣品(建立合適的濃度梯度):
檢測(cè)時(shí)一般采用1:50-1:400的稀釋度,應(yīng)采用較大稀釋體積進(jìn)行,一般保證樣品吸取量>20μl.
將稀釋好的樣品加入酶標(biāo)反應(yīng)孔中,每樣品少加雙孔,每孔100μl,置于37℃,40-60min.用洗滌液滿孔洗滌3遍,每遍3min.
4.加入酶標(biāo)抗體:
酶標(biāo)抗體:根據(jù)酶結(jié)合物提供商提供的參考工作稀釋度進(jìn)行.37℃,30-60min之間.短于30min往往結(jié)果不穩(wěn)定.每孔加100μl.洗滌同前.
5.加入底物液(現(xiàn)用現(xiàn)配):
*TMB-*尿素溶液,OPD-*底物液系統(tǒng)次之.
底物加入量:每孔100μl,置37℃避光放置3-5分鐘,加入終止液顯色.
6.終止反應(yīng):
每孔加入終止液50μl終止反應(yīng),于20min內(nèi)測(cè)定實(shí)驗(yàn)結(jié)果.
7.結(jié)果判斷:
OPD顯色后采用492nm波長(zhǎng),TMB反應(yīng)產(chǎn)物檢測(cè)需要450nm波長(zhǎng).檢測(cè)時(shí)一定要首先進(jìn)行空白孔系統(tǒng)調(diào)零.用測(cè)定標(biāo)本孔的吸收值與一組陰性標(biāo)本測(cè)定孔平均值的比值(P/N)表示,當(dāng)P/N大于2時(shí)作為抗體的效價(jià).(數(shù)值的大小依具體檢測(cè)要求而定.)Mouse myeloperoxidase-antineutrophil cytoplasmic antibody IgG,MPO-ANCA IgG ELISA試劑盒
Mouse β-Lactamase inhibitors,BLI ELISA試劑盒
Mouse nitric oxide,NO ELISA試劑盒
Mouse Beta-naphthol,β-Nph ELISA試劑盒
Mouse Complement 3,C3 ELISA試劑盒
Mouse Azidothymidine,AZT ELISA試劑盒
Mouse β-glucosidase ELISA試劑盒
Mouse dopamine,DA ELISA試劑盒
Mouse ultrasensitive thyroid-stimulating hormone,U-TSH ELISA試劑盒
Mouse Ultrasensitivity Thyroxine,u-T4 ELISA試劑盒
Mouse β-glucuronidase,βGD ELISA試劑盒
Mouse glutamic acid decarboxylase autoantibody,GAD-Ab ELISA試劑盒
Mouse Estradiol receptor,ER ELISA試劑盒
Mouse galactose-6-sulphate sulphatase,Gal-6S ELISA試劑盒
Mouse Parathyroid Hormone Related Protein,PTHrP ELISA試劑盒
Mouse L-phenylalanine,LPA ELISA試劑盒
Mouse anti-cardiolipin antibody IgA,ACA-IgA ELISA試劑盒
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Mouse anti-cardiolipin antibody IgG,ACA-IgG ELISA試劑盒
Mouse apelin 12,AP12 ELISA試劑盒
Mouse Interferon α,IFN-α ELISA試劑盒
Mouse pyruvate kinase,PK ELISA試劑盒
Mouse rudimental bovine serum albumin check-up ELISA試劑盒
Mouse CA724 ELISA試劑盒
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Mouse Peroxisome Proliferator-activated receptor γ,PPAR-γ ELISA試劑盒
Mouse toxic shock syndrome toxin,TSST-1 ELISA試劑盒
Mouse Cyclosporine A,CsA ELISA試劑盒
Mouse Complement 1 inhibitor autoantibody,C1INH ELISA試劑盒
Mouse Cyclosporine A,CsA ELISA試劑盒
Mouse para-aminobenzoic acid,PABA ELISA試劑盒
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Mouse β2-glycoprotein 1 antibody IgA/G/M,β2-GP1 IgA/G/M ELISA試劑盒
Mouse Linker for activation of T cell,LAT ELISA試劑盒
Mouse Endometrium Antibody,EMAb ELISA試劑盒
Mouse LDL-IC ELISA試劑盒
Mouse Ureaplasma urealyticum antibody,UU-Ab ELISA試劑盒
Mouse glial fibrillary acidic protein,GFAP ELISA試劑盒
Mouse Perinuclear anti-neutrophil cytoplasmic antibody,pANCA ELISA試劑盒
Mouse phosphatidylinositol antibody IgG/IgM,PI Ab-IgG/IgM ELISA試劑盒
Mouse 15-lipoxygenase,15-LO/LOX ELISA試劑盒
Mouse Interferon β,IFN-β/IFNB ELISA試劑盒
Mouse Troponin Ⅰ,Tn-Ⅰ ELISA試劑盒
Mouse Serum amyloid A,SAA ELISA試劑盒
Mouse anti-centrol and centrosome antibody,ACA ELISA試劑盒
Mouse Haptoglobin,Hpt/HP ELISA試劑盒
Mouse 16-αHydroxyestrogen 1,16-α OHE-1 ELISA試劑盒
Mouse α1-Acid glycoprotein,α1-AGP ELISA試劑盒
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