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上海人組織因子途徑抑制物（TFPI）ELISA試劑盒操作方法雙抗體夾心法

1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋蛋白質(zhì)含量為1～10μg/ml.在每個聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,4℃隔夜.次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘.（簡稱洗滌,下同）.

2.　加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時.然后洗滌.（同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔）.

3.　加酶標抗體：于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml.37℃孵育0.5～1小時,洗滌.

4.　加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10～30分鐘.

5.　終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml.

6.　結(jié)果判定：可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強,陰性反應(yīng)為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示.也可測OD值：在ELISA檢測儀上,于450nm（若以ABTS顯色,則410nm）處,以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性.

間接法1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋1～10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃隔夜；

2.次日洗滌3次；

3.加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時,洗滌；

4.（同時做空白、陰性及陽性孔對照）于反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標第二抗體（抗抗體）0.1ml；

5.37℃孵育35-60分鐘,洗滌；

6.’zui后一遍用DDW洗滌.

其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6.

發(fā)展前景

臨床測定技術(shù)的發(fā)展主要在于方法學的發(fā)展,而方法學的發(fā)展依托于試劑生產(chǎn)技術(shù)不斷進步更新和型標記物的應(yīng)用.分子生物學正在并zui終肯定會讓對整個生命科學有一個全面而*的認識,其對免疫測定技術(shù)發(fā)展的影響也是直接而又有效的,對以前一些難以檢測的生物活性物質(zhì)的測定,并且大大提高了檢測的靈敏度和特異性.人神經(jīng)激肽B(NKB)ELISA試劑盒 
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