豬瘟病毒抗體檢測試劑盒使用說明書

【原理】

        豬瘟（Classical swine fever, CSF）是由豬瘟病毒引起的豬急性接觸性傳染病。本病特征為發(fā)病急、高熱稽留和細小血管壁變性引發(fā)的廣泛性點狀出血、梗死和壞死。本病傳染性強，死亡率高。檢測特異性豬瘟抗體可作為豬瘟疫苗的免疫監(jiān)測及該病輔助檢測指標。

        本試劑盒采用ELISA方法檢測豬血清中的特異性豬瘟抗體。本試劑靈敏度高，特異性強，重復性好，操作方便快速，可分多次使用。

【試劑組成】

【操作程序】

1． 洗滌液配制 用蒸餾水或去離子水將濃縮洗滌液（2號液）按1：10稀釋，如取50ml濃縮液與450ml蒸餾水或去離子水充分混勻即為工作洗滌液。

2．樣本稀釋   用樣本稀釋液(5號液)將待檢血清樣本按1：40稀釋，如取5ul樣本與195ul樣本稀釋液，混勻。陰性、陽性對照品不用稀釋，直接加樣。

3．加樣反應   每次試驗設陰性對照2孔、陽性及空白對照各1孔(分別加入陰性、陽性對照及樣本稀釋液100ul)。樣本檢測孔每孔加已稀釋血清樣本100ul。37℃避光反應30分鐘后，甩去孔內(nèi)液體，每孔注滿工作洗滌液洗滌3次，每次均需停留1分鐘后再甩凈，拍干。

4．加酶反應   除空白對照孔外，每孔加酶結合物(1號液) 1滴。37℃避光反應30分鐘后，甩去孔內(nèi)液體，如上洗滌，拍干。

5．顯色反應   加底物液(3號液)和顯色劑(4號液)各1滴，混勻，37℃避光顯色10分鐘。加終止液(6號液)1滴，終止反應（加終止液后，藍色會變?yōu)辄S色）并判讀結果。

【結果判斷】

      陰性對照呈無色或淺黃色，陽性對照呈明顯黃色，表示試驗有效。

      以空白對照調(diào)零，用酶標儀于450nm（630nm作參比波長）讀取吸光度（A值）。待檢孔A值大于陰性對照A值平均值的2.1倍者判為陽性。如陰性對照A值的平均值低于0.08時按0.08計算。

【注意事項】

     1.試劑盒于2-8℃保存，有效期12個月。每次使用前應先平衡至室溫。

     2.未使用完的板條應密封保存。

     3.試劑盒中終止液具有腐蝕性，要小心使用。

     4.瓶蓋每次使用后要擰緊，各瓶蓋之間不可混用。不同批號試劑盒的試劑組份不可混用。

     5.試驗樣本應為無染菌、無血脂、無溶血的血清。任何樣本都應視為傳染源妥善處理。

     6. 37℃孵育時，建議使用水浴箱。如無條件，可在溫箱中放置濕盒進行反應并同時用不干膠膜封蓋板孔。