藍(lán)耳病病毒抗體檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書

【原理】

        豬繁殖與呼吸障礙綜合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS）又稱藍(lán)耳病，是由豬PRRS病毒引起的一種豬傳染病。藍(lán)耳病是以母豬妊娠后期發(fā)生流產(chǎn)、死產(chǎn)和產(chǎn)木乃伊胎，新生仔豬死亡率高，各年齡豬（尤其是仔豬）出現(xiàn)異常呼吸為特征的傳染性繁殖障礙病。其主要臨床特征是厭食、發(fā)熱、繁殖和呼吸障礙。檢測(cè)特異性豬藍(lán)耳病抗體可作為豬藍(lán)耳病疫苗的免疫監(jiān)測(cè)及該病輔助檢測(cè)指標(biāo)。

        本試劑盒采用ELISA方法檢測(cè)豬血清中特異性豬藍(lán)耳病抗體。本試劑靈敏度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好，操作方便快速，可分多次使用。

【試劑組成】

【操作程序】

1． 洗滌液配制 用蒸餾水或去離子水將濃縮洗滌液（2號(hào)液）按1：10稀釋，如取50ml濃縮液與450ml蒸餾水或去離子水充分混勻即為工作洗滌液。

2． 樣本稀釋   用樣本稀釋液(5號(hào)液)將待檢血清樣本按1：40稀釋，如取5ul樣本與195ul樣本稀釋液，混勻。陰性、陽(yáng)性對(duì)照品不用稀釋，直接加樣。

3． 加樣反應(yīng)   每次試驗(yàn)設(shè)陰性對(duì)照2孔、陽(yáng)性及空白對(duì)照各1孔(分別加入陰性、陽(yáng)性對(duì)照及樣本稀釋液100ul)。樣本檢測(cè)孔每孔加已稀釋血清樣本100ul。37℃避光反應(yīng)30分鐘后，甩去孔內(nèi)液體，每孔注滿工作洗滌液洗滌3次，每次均需停留1分鐘后再甩凈，拍干。

4． 加酶反應(yīng)   除空白對(duì)照孔外，每孔加酶結(jié)合物(1號(hào)液) 1滴。37℃避光反應(yīng)30分鐘后，甩去孔內(nèi)液體，如上洗滌，拍干。

5． 顯色反應(yīng)   加底物液(3號(hào)液)和顯色劑(4號(hào)液)各1滴，混勻，37℃避光顯色10分鐘。加終止液(6號(hào)液)1滴，終止反應(yīng)（加終止液后，藍(lán)色會(huì)變?yōu)辄S色）并判讀結(jié)果。

【結(jié)果判斷】

      陰性對(duì)照呈無(wú)色或淺黃色，陽(yáng)性對(duì)照呈明顯黃色，表示試驗(yàn)有效。

      以空白對(duì)照調(diào)零，用酶標(biāo)儀于450nm（630nm作參比波長(zhǎng)）讀取吸光度（A值）。待檢孔A值大于陰性對(duì)照A值平均值的2.1倍者判為陽(yáng)性。如陰性對(duì)照A值的平均值低于0.08時(shí)按0.08計(jì)算。

【注意事項(xiàng)】

      1.試劑盒于2-8℃保存，有效期12個(gè)月。每次使用前應(yīng)先平衡至室溫。

      2.未使用完的板條應(yīng)密封保存。

      3.試劑盒中終止液具有腐蝕性，要小心使用。

      4.瓶蓋每次使用后要擰緊，各瓶蓋之間不可混用。不同批號(hào)試劑盒的試劑組份不可混用。

      5.試驗(yàn)樣本應(yīng)為無(wú)染菌、無(wú)血脂、無(wú)溶血的血清。任何樣本都應(yīng)視為傳染源妥善處理。

      6. 37℃孵育時(shí)，建議使用水浴箱。如無(wú)條件，可在溫箱中放置濕盒進(jìn)行反應(yīng)并同時(shí)用不干膠膜封蓋板孔。