基本信息
中文名：蛋白質濃縮技術
外文名：Protein Concentration Technology
技術方法：透析袋濃縮法、冷凍干燥濃縮法等
雜質種類：水分、離子、小分子物質
所用試劑：聚乙二醇、蔗糖、凝膠
所用材料：透析袋、薄膜
蛋白質濃縮技術屬于生物大分子的濃縮技術，目的是利用物理或化學的方法，除去蛋白質溶液中的水分、離子和其它小分子物質，使單位體積內的蛋白質濃度大幅度提高。蛋白質樣品經過一系列的分離提取和層析會導致樣品的>稀釋，而許多分析和研究都需要高濃度或高純度的樣品，所以蛋白質樣品的濃縮至關重要 。蛋白質濃縮技術主要有透析袋濃縮法、冷凍干燥濃縮法、吹干濃縮法、超濾膜濃縮法、凝膠濃縮法等。
透析袋濃縮法
利用透析袋濃縮蛋白質溶液是應用廣的一種。將要濃縮的蛋白質溶液放入透析袋扎緊，把高分子[分子量（MW）:6 000~12 000]聚合物如聚乙二醇或蔗糖等撒在透析袋外即可。但在使用聚乙二醇時在個別情況下會使蛋白質稍有變性，而優(yōu)點是形成的平衡時間較短，通常到達30%時蛋白質就會達到最大量的沉淀。另外也可將吸水劑配成30%~40%濃度的溶液，將裝有蛋白液的透析袋放入即可。操作時應在4℃環(huán)境中，以免蛋白質變性。吸水劑用過后，可放入烘箱中烘干反復使用 。
冷凍干燥濃縮法
此為濃縮蛋白質的最佳方法之一，它既不易使蛋白質變性，又可保持蛋白質中天然成分。其原理是在冷凍狀態(tài)下直接升華去除水分。具體做法是將蛋白液在低溫下冷凍，然后移置干燥器內（干燥器內裝有干燥劑，如NaOH、CaCl?和硅膠等）。密閉，迅速抽真空，并維持一定的真空狀態(tài)數(shù)小時后即可獲得含有蛋白質的干燥粉末。蛋白質的粉末形狀與其所含的鹽有關。干燥后的蛋白質可保存于4℃環(huán)境中。另外也可用專業(yè)凍干機進行冷凍干燥，效率更高并且一次容量也大。
吹干濃縮法
可將待濃縮的蛋白質溶液裝入透析袋內，在4℃環(huán)境下用電風扇吹。此法較為簡單，但速度較慢。
超濾膜濃縮法
超濾法是使用一種特殊的薄膜對溶液中各種溶質分子進行選擇性的快速過濾方法，液體在一定壓力下（氮氣壓或真空泵壓）通過膜時，溶劑和小分子可透過，而大分子被截留。這是近年來發(fā)展起來的新方法，適于生物大分子尤其是蛋白質和酶的濃縮或脫鹽，并具有成本低、操作方便、條件溫和，能較好地保持生物大分子的活性，回收率高等優(yōu)點。應用超濾法關鍵在于膜的選擇，不同類型和規(guī)格的膜，其水的流速，分子量截留值（即大體上能被膜保留分子的最小分子量值）等參數(shù)均不同，必須根據(jù)具體需要來選用。另外，超濾裝置形式，溶質成分及性質、溶液濃度等都對超濾效果有一定影響。
凝膠濃縮法
選用孔徑較小的凝膠，如Sephadex G-25或G-50，將凝膠直接加人蛋白質溶液中。根據(jù)干膠的吸水量和蛋白質溶液需濃縮的倍數(shù)而稱取所需的干膠量。放入冰箱內，凝膠粒子吸水后，通過離心除去，但成本較大。
其他濃縮法
其他的蛋白質濃縮方法還有:丙酮、三氯醋酸沉淀蛋白質，但會引起蛋白質的變性，可用于SDS- PAGE;低溫有機溶劑沉淀法也可沉淀蛋白質，要注意pH值的影響;離子交換層析等都可以用于蛋白質的沉淀。
參考資料
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